科学观点
所有动物物种饲料调味剂时，用单宁酸的安全性和有效性的科学意见1
EFSA 动物饲料中使用的添加剂和产品或物质问题小组 （FEEDAP）2，3
欧洲食品安全局（EFSA），帕尔马，意大利
摘要
单宁酸是水解单宁的同义词，在自然界中广泛分布。使用单宁酸作为饲料添加剂，高达15毫克/千克饲料是所有动物物种是安全的。在建议的使用条件下，使用单宁酸作为饲料添加剂对消费者没有安全风险。在没有数据的情况下，谨慎的做法是将添加剂视为对工人具有潜在危险，接触皮肤、眼睛和粘膜或吸入接触。单宁酸天然存在于许多植物物种中。使用单宁酸作为饲料添加剂被认为是对环境安全的。单宁酸被公认为食品调味剂，并被列入欧盟食品调味剂清单。由于它在饲料中的功能与食物的功能基本相同，因此无需进一步证明疗效。
©欧洲食品安全局，2014年
关键词
感官添加剂，调味剂，单宁酸，安全性，功效
1应欧盟委员会的请求，2014年9月11日通过EFSA-Q-2010-01513问题。
2小组成员：加布里埃尔·阿奎利纳， 瓦西莱奥斯·班皮迪斯、玛丽亚·德·卢尔德·巴斯托斯、卢西奥·吉多·科斯塔、格哈德·弗拉乔斯基、米科拉伊·安东尼·格拉拉克、克里斯特·霍格斯特兰德、卢博米尔·伦、塞昆迪诺·洛佩斯-普恩特、乔瓦纳·马泰利、巴尔塔萨尔·马约、费尔南多·拉莫斯、德里克·伦肖、吉多·雷琴、玛丽亚·萨雷拉、克里斯汀·塞耶尔森
罗伯特·约翰·华莱士和约翰内斯·韦斯顿多夫通讯：FEEDAP@efsa.europa.eu
3确认：小组感谢饲料调味品工作组成员，包括保罗·布兰托姆和安妮-卡特琳·伦德比·哈尔多森，感谢他们就这一科学意见所做的准备工作。
建议引文：EFSA FEEDAP 面板（EFSA 添加剂和动物饲料中使用的产品或物质的 EFSA 面板），2014 年。所有动物物种饲料调味剂时，对单宁酸的安全性和有效性的科学意见。EFSA期刊 2014;12（10）：3828， 18 页 doi：10.2903/j.efsa.2014.3828
可在线： www.efsa.europa.eu/efsajournal
©欧洲食品安全局，2014年
SUMMARY
应欧洲委员会的请求，要求动物饲料中使用的添加剂和产品或物质小组就单宁酸对所有动物物种的安全性和有效性提出科学意见。单宁酸是水解单宁的同义词，在自然界中广泛分布。
根据文献综述，可以为所有动物物种确定使用单宁酸作为饲料添加剂的安全性，含量可达15毫克/千克。
在建议的使用条件下，使用单宁酸作为饲料添加剂对消费者没有安全风险。
在没有数据的情况下，谨慎的做法是将添加剂视为接触皮肤、眼睛和粘膜或吸入对工人的潜在危险。
使用单宁酸作为饲料添加剂被认为是对环境安全的。
单宁酸被公认为食品调味剂，并被列入欧盟食品调味剂清单。由于它在饲料中的功能与食物的功能基本相同，因此无需进一步证明疗效。
可包含内容
背景
第1831/2003号条例第4条规定了共同体授权用于动物营养的添加剂的规则。特别是，该条例第4条第1款规定，任何人如寻求饲料添加剂或饲料添加剂的新用途，应根据第七条提出申请。特别是， 该规例第10条第（2）款亦规定，对于第十条第（一）款所指的现有产品，应按照第七条提出申请，最迟应在根据第70/524/EEC号指令授予授权期限有限的添加剂的授权期届满前一年提交，且自本条例生效后最长七年内，对未经期限或根据第82/471/EEC号指令授权的添加剂进行授权。
欧盟委员会收到饲料香料授权联合会欧洲经济利益集团（FFAC EEIG）5的请求，要求在表1所述条件下用作所有动物物种（类别：感官添加剂;功能组：调味剂）的饲料添加剂时，授权使用单宁酸。
根据第1831/2003号条例（EC）第7（1）条，欧盟委员会根据第4条第1款（授权饲料添加剂或饲料添加剂的新用途）和第10（2）条（对授权饲料添加剂的重新评估）向欧洲食品安全局（EFSA）提出申请。EFSA直接从申请人收到支持此申请的技术档案。6根据该条例第8条，欧洲食品安全局在核实申请人提交的具体情况和文件后，应当进行评估，以确定饲料添加剂是否符合第5条规定的条件。自2011年8月9日起，欧洲食品安全局认为支持申请的详情和文件有效。
根据关于人类用于治疗轻度腹泻、口腔黏膜和皮肤和出血的医药产品的第2001/83/EC号指令，单宁酸获得授权。7
单宁酸被欧洲委员会（2000年）列出，并列在欧盟用于食品的调味物质清单中，其编号为16.0808，并列入欧盟饲料添加剂登记册。
JECFA（世卫组织，1990年）评估单宁酸作为过滤辅助，而不是调味品评估计划的一部分。
参考的 T ERMS
根据第1831/2003号条例第8条，欧洲食品安全局应确定饲料添加剂是否符合第5条规定的条件。EFSA 应在表 1 所述条件下使用单宁酸时，应就目标动物、消费者、用户和环境的安全以及单宁酸的功效提出意见。
欧洲议会和理事会2003年9月22日关于动物营养添加剂的第1831/2003号条例。OJ L 268， 18.10.2003， 第29页。
5 2013年3月13日，欧洲食品安全局从申请人处获悉，FFAC EEIG于2012年12月19日被清算，其申请人的权利被移交给FEFANA Asbl（欧盟特种饲料成分协会及其混合物，路易丝大道，130A，1，1050布鲁塞尔，比利时布鲁塞尔）。
6欧洲食品安全局档案参考：FAD-2010-0123。
欧洲议会和理事会2001年11月6日关于共同体关于人类使用的医药产品守则的第7号指令。OJ L 311， 28.11.2001， 第67页。
8欧盟委员会执行条例（欧盟）2012年10月1日第872/2012号，通过欧洲议会和理事会第2232/96号条例（EC）规定的调味物质清单，在附件一中将其引入
欧洲议会和理事会第1334/2008号条例，废除了委员会第1565/2000号条例和委员会第1999/217/EC号决定。
表1：申请人建议的添加剂使用说明及条件
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添加剂 |
单宁酸 |
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注册号/EC 否 （如果适用） |
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添加剂的类别 |
2. 感官添加剂 |
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添加剂的功能组 |
b） 调味化合物 |
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描述 |
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组成，描述 |
化学配方 |
纯度标准（如果适用） |
分析方法（如果适用） |
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单宁酸 （CAS-No 72401-53-79) |
C76H52O46 |
96% |
HPLC10 |
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商号（如适用） |
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授权持有人的姓名（如适用） |
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使用条件 |
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动物种类或种类 |
最大年龄 |
最低内容 |
最大内容 |
提款期（如适用） |
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mg 或活动单位或 CFU/kg 完整进料（选择适用内容） |
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所有物种和类别 |
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标签的其他规定和额外要求 |
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使用的特定条件或限制（如果适用） |
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处理的具体条件或限制（如果适用） |
所有进料，仅作为预混合物的一部分 |
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上市后监测（适当） |
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补充饲料中使用的具体条件 （如果适用） |
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最大残留限制 （MRL） （如果适用） |
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标记残留物 |
动物种类或种类 |
目标组织或食品 |
组织中的最大含量 |
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9单宁酸由社区登记册饲料和食品登记册根据CAS No 72401-53-7注册。美国药典（美国药典，2009年），费纳罗利的风味成分手册（Fenaroli，2010年），食品化学品法典（FCC，2008年），国际香料行业组织和申请人的成员分配给本产品CAS No 1401-55-4。
10可在 EURL 网站上找到。
A SSESMENT
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简介
单宁酸是水解单宁的同义词，在自然界中广泛分布（例如，
奎尔库斯感染，凯萨尔皮尼亚脊柱瘤或属鲁氏（世卫组织，2009年）。味道很紧。
单宁酸已被粮农组织/世卫组织食品添加剂联合专家委员会（世卫组织，1990年）评为过滤助剂，而不是调味剂。这一评估假定任何残留的单宁在使用后从食物中去除。欧洲食品安全局（EFSA）食品接触材料、酶、调味剂和加工辅助剂（CEF）小组迄今尚未将单宁酸视为食品调味剂。然而，单宁酸确实出现在欧盟（EU）的调味物质清单中，用于食品，欧盟风味信息系统（FLAVIS）编号16.08011。这一列入是在欧洲委员会（2000年）将单宁酸列为调味物质之后作出的，尽管没有进行正式的安全评估。
饲料香料授权联盟（FFAC）向饲料行业提供香料，已申请授权使用单宁酸作为饲料添加剂（类别：感官添加剂、调味化合物），用于所有动物物种。
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特征化
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活性物质的特征
单宁酸是胆酸的低分子量聚合物，与葡萄糖酯化的3加仑酸（欧洲药典，2010年）的可变成分。它是一种黄褐色粉末，通常通过从许多著名的植物来源（如卡斯塔内亚西提瓦、奎尔库斯感染或Rhus spp.）提取水或有机溶剂获得。
单宁酸有化学摘要服务 （CAS） 编号 72401-53-7 和 C76H52O46的名义分子配方在欧盟饲料添加剂登记册和食品调味剂联盟清单中。然而，美国药典（2005年）、Fenaroli 的《风味成分手册》（Burdock，2010）、食品化学品法典（FCC，2008 年）和国际市场香料工业组织 （IOFI） 为本产品分配了 CAS 编号 1401-55-4。申请人认为两个CAS编号是同一物质的同义词。
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分类建议
申请人规定，添加剂的单宁酸含量为96%或以上，符合美国药典和食品化学品法典（单宁酸=93%的干物质（DM）和低于12%的水。从两个植物来源（Caesalpinia spinosa和Quercus感染）对五个批次的重力分析（通过皮粉沉淀试验）表明，在所有情况下（从DM的96.2%到98.4%）12个中，这一规格都超过了这一规格。
申请人指出，其余材料含有低分子量馏分，如胆酸、二甘酸和/或低高基酯的奎宁酸，如单醇或多吉合金奎尼酸。没有提交任何分析数据来支持本声明。
申请人指定，重金属含量（表示为铅当量）为±40毫克/千克，砷含量为<3毫克/千克，铅含量为<2毫克/千克。六个批次的分析显示
11欧盟委员会执行条例（欧盟）2012年10月1日第872/2012号，通过欧洲议会和理事会第2232/96号条例（EC）规定的调味物质清单， 在欧洲议会和理事会第1334/2008号条例附件一中介绍该条例，并废除委员会第1565/2000号条例和委员会第1999/217/EC号决定。OJ L 267， 2.10.2012， 第 1 页.
12技术档案/补充信息 2013 年 10 月/Annex_Supplier_Caesalpinia spinosa.pdf 和 Annex_Supplier_Quercus感染.pdf
符合这些值。然而，镉和汞不是单独测量的。该添加剂不含树脂物质（浊度测试）13，剩余溶剂（丙酮或乙酸乙酯）低于《兽药产品注册技术要求协调国际合作》规定的水平（EMA，2010年）。申请人提供了三批14种微生物污染的证据（丝状真菌、酵母、肠杆菌、大肠杆菌<10个菌落形成单位/克，沙门氏菌在10克中无法检测）。
来自单个源的四个批次的颗粒大小分布由激光衍射确定。超过50%的颗粒直径低于50μm。在同一四批产品中，使用Heubach测速仪15测定了除尘电位，平均值为9.2克/立方米。
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制造工艺
单宁酸在研磨成细粉后，从各种植物来源中用水、丙酮或乙酸乙酸提取（例如，Quercus感染，Caesalpinia spinosa和选定物种的Rhus）。研磨后，溶剂蒸发。蒸发步骤后，粉末被清洗和干燥。
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稳定性
申请人建议，当这种添加剂在推荐条件下（在阴凉干燥的地方）储存在封闭的容器中时，其保质期为五年。实验证据不支持这一点。
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使用条件
该添加剂拟用于所有动物物种的饲料，建议使用水平为5至15毫克/千克的完整饲料16。该添加剂不用于饮用水17。
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欧洲联盟参考实验室对分析方法的评估
EFSA 已经验证了 EURL 报告，因为它与用于控制单宁酸的方法有关。EURL 报告执行摘要可在附录中找到。
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安全
FEEDAP 小组指出，单宁酸可以从具有不同特性的各种来源中提取。评估是在已发表的关于常见来源的单宁的文献上进行的，如橡树叶和甜栗子，尽管人们认识到，许多其他杂质来源可以生产并在市场上销售。
此评估与申请人指定的产品的相关性不确定;但是，可以假定它可能适用于符合美国药典或食品化学法典规范的所有产品。
- 目标物种的安全性
- 申请人没有提供对目标动物的耐受性研究。评估基于已发表的文献。
- 13技术档案/第二节/第7页。
- 14技术档案/补充资料 2013年10月/附件微生物学。
- 15技术档案/补充信息 2014 年 1 月/Annex_i_PSD_and_Dust-pot.pdf
- 16技术档案/补充信息 2013 年 10 月。
- 17技术档案/补充信息 2012 年 1 月。
- 鲁明茨
- 长期以来，橡树中毒一直被认为是牛的一个问题，在较小的程度上，当动物获得和摄入不成熟的叶子和最近掉落的橡子时，在较小的程度上。毒性作用归因于目前可水解的单宁，在这种不成熟的组织中达到其最高浓度。然而，对小牛故意喂养橡树叶与其他给予匹配数量的纯化单宁酸的比较表明毒性的程度和模式有明显差异。橡木喂养的小牛产生了肾衰竭的预期迹象，而单宁酸喂养的小牛仍然健康（Plumlee等人，1998年）。只有当小牛被给予高得多的单宁酸水平（> 4 400毫克/千克体重（bw））时，临床症状才出现，表现为血红蛋白血症，而不是肾衰竭。
- 鲁门代谢似乎可以防止单宁酸的明显毒性（Murdiati等人，1992年）。因此，成人反胃动物可以耐受饲料中15 000~25 000毫克/千克饲料中的可水解单宁水平，而不会在性能特性上产生任何可检测的损失，无论是以生长还是牛奶生产来衡量（Silanikove等人，1996年;弗鲁托斯等人，2004年;克鲁格等人，2010年;刘等人，2013年）。前牛小腿似乎更容易中毒，但引起临床症状所需的单宁酸浓度远远高于为调味剂而建议的浓度（Plumlee等人，1998年）。
- 除了直接与橡木中毒有关的研究外，其他一些出版物还涉及在非反胃动物的饮食中添加单宁酸的问题。自从在欧盟去除抗生素促进生长以来，其中许多都集中在单宁酸制剂的潜力上，以提高性能或控制感染。虽然这类研究本身不能被视为耐受性研究，但它们通常涉及的酸浓度大大高于为调味剂而建议的浓度，因此确实提供了耐受水平的信息。在大多数情况下，单宁酸的来源是甜栗子（卡斯塔内亚沙提瓦）的商业产品。
- 猪
- 在屠宰（100公斤）之前，开始体重约为30公斤的猪的生长和饲料摄入量不受从甜栗子/千克饲料中加入2 000毫克单宁酸制剂的影响（Prevolnik等人，2012年）。同样，在三周的喂养试验中，起始体重约为15公斤的小猪每天平均体重增加，没有受到1 500毫克单宁酸制剂/千克饮食的显著影响，也没有对血液学参数产生影响。然而，应该指出的是，测试饮食还包括有机酸，单宁酸饮食在数值上比基础饮食低（Stukelj等人，2010年）。这表明，年轻的动物可能对单宁酸的存在更加敏感。这一建议得到了一项起始重量= 6公斤小猪的研究的支持，该研究以125、250、500或1 000毫克单宁酸/千克饲料为补充，共补充了28天的饮食。这项研究显示，饲料与增益比呈线性增加，每日体重增加、红细胞计数、血红蛋白和血球的线性减少与单宁酸水平增加（Lee等人，2010年）。应当指出，所采用的统计方法不允许比较不同处理手段。然而，血液学参数似乎受到1 000毫克/千克治疗的影响，而低剂量的效果则不太明显。对于动物技术参数，不利影响似乎从250毫克/千克开始。
- 家禽
- 一项对鸡进行育肥的研究表明，在饮食中加入单宁酸对生长或饲料摄入量没有不利影响，浓度高达2 000毫克的板栗木/千克饲料的肉酸制剂为42天（Schiavone等人，2008年）。然而，其他报告表明，在栗木/千克饲料中超过1 000毫克单宁酸的浓度下，生长和饲料摄入量在41天的试验中减少（Jamroz等人，2009年），35天最多3万毫克的单宁酸/千克饲料会损害鸡的免疫功能（Marzo等人，1990年）。在母鸡收到10 000，2000或40 000毫克单宁酸/千克饲料，对饲料消费，鸡蛋生产，饲料没有影响观察那些剂量最低的鸟类的利用率、生育力或孵化性。在两个最高剂量的情况下，鸟类的饲料摄入量和卵子产量显著减少（布雷克斯利和威尔逊，1979年）。
- 兔子
- 在与新西兰雄兔的两项研究中，在5000毫克或10000mg/kg饲料中加入21天的单宁酸制剂（来自栗子木材）对生长或饲料转化没有不利影响，这明显优于未给予单宁酸的对照组（Liu等人，2011年，2012年）。
- 与饮食其他成分的相互作用
- 单宁酸与蛋白质相互作用，这可能导致蛋白质的消化性降低（Karamaé，2009年）。单宁酸（5、10、15和20克/千克大鼠饮食）已证明会干扰铁的吸收，但浓度高于建议用于调味剂的浓度（Afsana等人，2004年;卡拉马奇，2009年）。
- 目标物种安全结论
- 发表的研究表明，成年反胃动物的单宁酸制剂含量高达15000毫克/千克，而10000毫克/千克的饲料对母鸡的产卵不会对这些物种造成不利影响。兔子耐受高达10000毫克/千克，猪育肥可耐受高达1500毫克/千克，鸡的育肥耐受能力可达1000毫克/千克，无不良影响。年轻的动物似乎更敏感（> 1 500毫克/千克饲料对小牛有害）。在与已心性小猪的研究中，接受125毫克/千克的动物没有不良反应的迹象。在所有情况下，显示安全值比建议用作饲料调味料的值高出几个数量级。
- 考虑到这些数据支持猪、家禽和牛的安全，因此安全范围很大，FEEDAP小组的结论是，使用单宁酸作为饲料添加剂，最高达15毫克/千克饲料，对所有动物物种都是安全的。
- 消费者的安全
- 吸收、分配、代谢和消除
- 单宁酸本身是一种在消化道中吸收不良的聚合物（中村等人，2003年）。单宁酸在肠道中被细菌或酶降解，其降解产物被吸收。在从牛体内收集的反胃液体进行体外研究表明，单宁酸被转化为胆酸、皮罗醇和雷索平醇。在孵育48或72小时后，既不能检测到单宁酸，也不能检测胆酸（Singh等人，2001年）。这种降解归因于反胃动物中大量存在的微生物群（Goel等人，2005年;明书等人，2006年。负责它的酶是坦纳斯（单宁酸氢酶），在几种动物物种的胃肠道中降解单宁，主要是反胃动物和一些鱼类（曼达尔和戈什，2013年）。在其他物种（牛、马、猪、狗和羊）的胃肠道中常见的粪便细菌（链球菌，猪，狗和羊）也表现出的坦纳斯（Sly等人，1997年）。
- 大鼠血清中检测到的单宁酸的主要代谢物为口服后4-O-甲基胆酸、皮罗醇和雷索霉醇。这些代谢物作为游离或硫酸盐酸（3，4，5-三羟基苯酸）（0.01%）排泄到尿液中，自由或硫酸4-O-甲基高酸（0.10%），皮罗加洛（1，2，3-三羟基苯）（0.24%）和再西尔西诺（1，3-二羟基苯）（2.06%）。大约60%的摄入单宁酸在54小时内在粪便中被发现，同时少量的胆酸、皮罗醇和雷索西诺尔（Nakamura等人，2003年）。
- 胆酸是一种水解产物，口服给大鼠的尿液中，主要以4-O-甲基胆酸的形式排泄，但还发现胆酸不变（EFSA，2012a，b）。大鼠胆酸代谢研究表明，除了4-O-甲基酸和自由胆
- 酸，几个皮罗醇衍生物在口服后排泄在尿液中：游离和胶凝性皮罗醇及其甲基化衍生物2-O-甲基丙丙醇，自由排泄或与胶质酸或硫酸盐结合后（Yasuda等人，2000年）。大鼠的药代动力学研究表明，* 14C_resoinol主要在尿液中作为胶黄素结合体被消除，并且没有迹象表明组织（肝脏、皮肤、脂肪、肌肉）存在生物累积的迹象。在一次口服剂量（112mg/kg bw）到F344大鼠后， [14C_resoinol 被迅速吸收， 代谢和排泄.大部分施用剂量 （90.8~92.8%）在24小时内在尿液中作为胶黄素结合体被排掉（65%）和其他偶联代谢物（即单硫酸盐、混合硫酸盐-格鲁曲尼和二甘醇）。在高剂量（225毫克/千克bw，单剂量或连续五天施用每日剂量）获得可比结果（Kim和Matthew，1987年）。当 [14C_resoasinol 被下皮施用到斯普拉格- Dawley 大鼠 （10， 50 或 100 mg/kg bw）， 98% 的应用剂量在 24 小时内通过尿液排泄， 主要是作为胶质联聚物 （Merker等人， 1982 年）.
- Murdiati等人（1992年）描述了对绵羊中胆酸、单宁和可水解单宁代谢的几项研究。在其中一个实验中，胆酸或单宁酸（四天每天0.38克/千克的剂量率）通过红龙或食人素对羊进行加压。另一项实验涉及将单宁酸或胆酸（每天两次0.5克/千克）放入鲁门，持续14天。在第三个实验中，动物被喂食含有2.3%水解单宁的饮食，为期17天。在分析代谢物的几个时间点采集了文奇卡、血液和尿液。在用单宁酸或胆酸和羊的醇状消化器中，在所有动物的食人疗法中发现了皮罗加洛和雷索霉醇。胆酸的鲁门管理后，在尿液中发现依索霉素胶精。将单宁酸管理到鲁门中，除了对硫辛醇格鲁酮素胶核糖核酸外，尿液中还存在二苯二苯乳酮糖核糖醇、phloroglucinol和resolinol。在喂龙角的绵羊的尿液中也观察到类似的代谢特征。代谢物的泌尿消除在几天后达到高原，随后下降。作者将这种排泄的减少归因于整个研究中胆酸降解的增加。
- 在非反胃动物体内几乎没有体内代谢研究，这些研究记录不足，并且使用分析方法，这些分析方法可能未检测到代谢物的微量水平，因为它们不符合现代标准。在这些代谢物4-O-甲基高酸和皮罗加醇被识别在兔子的尿液中，喂养含有0.5%胆酸的饮食（Booth等人，1959年）。在用单宁酸或胆酸喂养的母鸡的尿液中也发现了同样的代谢物（波特和富勒，1968年）。
- 在人类中，在口服胆酸后，在血浆和尿液中检测到4-O-甲基胆酸和胆酸作为自由衍生物和偶联衍生物（Shahrzad和Bitsch，1998年）。
- 毒理学
- 1.有关鞣酸的致突变性/遗传毒性的研究很多，但许多测试要么未经验证以评估遗传毒性风险，要么不符合当前经济合作与发展组织（经合组织）方法指南。仅对可水解单宁的研究进行了评估。
- 单宁酸在五种细菌反向突变测试中没有致突变性（Mohtashamipur和Norpoth，1984； Rashid等人，1985； Nagabhushan等人，1991； Watanabe等人，1998； Chen和Chung，2000）和一种SOS色度测试。 大肠杆菌 （Kevekordes等，1999）。在哺乳动物细胞的一些体外 试验中，包括彗星试验（Chu，2002年）和染色体畸变试验（Stich和Powrie，1982年； Stich和Dunn，1986年）和微核试验（Stich和Dunn，1986年），在诱变性方面取得了积极的成果 。 Sanyal等，1997）。单宁通过口服管饲法以250、500或750 mg / kg bw的单剂量和体内 腹膜内（ip）给予500 mg / kg bw的剂量 在BALB / c小鼠中进行骨髓微核试验，获得阴性结果。比例
- 循环中的多色红细胞不受治疗的影响，但在腹膜内注射后骨髓会暴露出来，因此得出的结论是单宁酸在体内 没有致突变性 （Gimmler-Luz等，1998）。的 体外 结果表明对单宁酸是诱变的电位，但结果 在体内 试验表明，致突变性不表达 在体内。
- 用饮用水中0.025％，0.05％，0.1％，0.2％和0.4％的剂量对12只雄性和12只雌性F344大鼠进行了为期13周的慢性毒性研究（Ogasawara等，1990）。没有计划外的死亡率，并且对体重增加，饲料消耗，血液学或器官重量没有治疗相关的影响。0.4％组的摄水量略有下降。在某些治疗组和对照组之间，在末期血液中测得的一些血液生化参数之间存在统计学上的显着差异，但由于缺乏剂量反应关系以及两性之间的不一致，因此没有任何差异反映出任何差异。毒理学过程。器官的显微镜检查显示治疗的男性肝脏坏死，作者认为这是“次要的”。
- 对50只雄性和50只雌性F344大鼠进行了致癌性研究（Onodera等，1994）。本研究中使用的制剂由85.69％的单宁酸，8.84％的没食子酸和
- 7.5％的水分。通过0.25％和0.5％的饮用水（分别对应于男性中单宁酸的平均剂量分别为131和243 mg / kg bw，女性每天159和291 mg / kg bw的形式）给药104一周，然后再过10周，在此期间，所有组都喝蒸馏水。每天观察动物的临床体征。没有血液或尿液样本。进行尸检，测量器官重量，并在显微镜下检查各种组织以及任何肿瘤。在所有治疗组中，饮用水的摄入量均以剂量相关的方式略有减少，并且在两种剂量下，女性的体重增加均被抑制，这表明较低（在低剂量和高剂量组中分别降低了7％和8％，在实验结束时，体重要比对照组的体重高。没有死亡。与对照组相比，未观察到肿瘤发生率增加或肿瘤部位或类型的差异。对非肿瘤性病变的发生率也没有治疗相关的影响。没有报告临床体征和器官重量的结果。
- 没有关于生殖毒理学的研究。
- 1. 接触申请人尚未提供有关暴露的信息，据FEEDAP专家组了解，没有可用信息。尽管没有关于欧洲人群的暴露数据，但欧盟已批准单宁酸为食品调味剂。美国食品药品监督管理局（FDA）估计，在美国，各种食品中单宁酸的添加量可以达到100 mg / kg 18。考虑到这一点，并且考虑到动物饲料的最大建议使用量为15 mg / kg完全饲料，并且预计不会在组织中积累，因此在动物营养中的使用不太可能会显着增加本底暴露。
- 2. 关于消费者安全的结论
- 单宁酸本身 很难从肠腔中吸收 ，但在胃肠道中会大量降解。它在目标物种，实验动物和人类中的代谢产物非常相似，并且似乎被有效地排泄了。预计动物源性食品中没有残留
- 18 在线提供：http：//www.accessdata.fda.gov/scripts/fcn/fcnDetailNavigation.cfm？rpt = scogslisting＆id = 348
- 这表明消费者不太可能会收到相当数量的母体化合物或其代谢产物。单宁酸的毒理学研究仅限于评估遗传毒性，短期重复剂量毒性和致癌性。从结果 体外 遗传毒性试验表明潜在的遗传毒性 在体外，但有一个不存在的基因毒性的 体内 并且没有口服暴露后致癌的证据。90天毒性研究的结果表明，治疗的雄性大鼠的肝脏坏死（但雌性没有），但在104周的大鼠致癌性研究中未发现类似的病变。在90天的研究中，女性没有肝病灶，在致癌性研究中，在男女中均没有肝病灶，提示这些病灶并不是由于单宁酸治疗而产生的。
- FEEDAP小组的结论是，在建议的使用条件下使用鞣酸作为饲料添加剂不会对消费者造成安全隐患。
- 2. 用户安全
- 没有为用户提供关于安全性的实验数据。在材料安全数据表19中识别出皮肤和眼睛接触的潜在危险。所测试的四批添加剂具有大量的细小颗粒和较高的粉尘潜力，这表明工人可能因吸入单宁酸粉尘而暴露。因此，FEEDAP小组认为，应谨慎考虑将添加剂暴露于皮肤，眼睛和粘膜或通过吸入对工人有潜在危害。
- 3. 环境安全
- 单宁酸天然存在于饲料原料中。用作饲料添加剂的可能性极小，不会增加其在环境中的浓度。因此，没有预见到对环境安全的风险。
- 2. 功效
- 单宁酸被列入欧盟食品调味剂清单。由于其在饲料中的功能与在食品中的功能基本相同，因此无需进一步证明其功效。
- 3. 地面污染物
- 对于所有动物来说，使用单宁酸达到建议的最高最高15mg/kg完整饲料水平是安全的。
- 在建议的使用条件下使用鞣酸作为饲料添加剂对消费者没有安全隐患。
- 在没有数据的情况下，应谨慎考虑将添加剂视为可能通过皮肤，眼睛和粘膜或吸入对工人造成危害。
- 单宁酸作为饲料添加剂被认为对环境安全。
- 单宁酸被认为是一种食品调味剂，被列入欧盟的食品调味剂清单。由于其在饲料中的功能与在食品中的功能基本相同，因此无需进一步证明其功效。
- 文件免费提供给欧洲食品安全局
- 1.化学定义的调味料–单宁酸。2010年12月。由饲料调味料授权联盟欧洲经济利益集团（FFACEEIG）提交。
- 19技术资料/第二节/附件II.2。MSDS单宁酸。
- 2.化学定义的调味料–单宁酸。补充信息。2012年1月。由饲料调味料授权联盟欧洲经济利益集团（FFACEEIG）提交。
- 3.化学定义的调味料–单宁酸。补充信息。2013年10月。由饲料调味料授权联盟欧洲经济利益集团（FFACEEIG）提交。
- 4.化学定义的调味料–单宁酸。补充信息。2014年2月。由饲料调味料授权联盟欧洲经济利益集团（FFACEEIG）提交。
- 5.欧盟饲料添加剂参考实验室关于化学定义的调味品–单宁酸分析方法的评估报告。
- 6.通过科学网收到了会员国的评论。
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一个附录
欧盟饲料添加剂参考实验室关于化学定义香精的分析方法的评估报告的执行摘要–第30组（鞣酸）20
在本申请中，根据分类，根据第4（1）和10（2）条寻求 饲料添加剂鞣酸（Flavis 16.080）在“感官添加剂”，功能组2（b）“调味化合物”下的授权 （EC）1831/2003号法规附件I的系统。 单宁酸 属于 化学定义香精–第30组（CDG 30） –在委员会法规（EC）第1565/2000号附件I中被称为–“ 杂类物质 ”。寻求针对所有物种和类别使用饲料添加剂的 授权 。
单宁酸 为黄褐色颗粒状粉末，最低纯度为93％。 单宁酸 仅在与其他调味物质 混合为调味化合物的情况下掺入 饲料 或饮用水 中。申请人建议没有最小或最大，但是饲料 中调味化合物的正常含量为 0.1-100mg / kg。
用于鉴定的 单宁酸 的 饲料添加剂，本申请人提出的国际公认的欧洲药典方法（欧洲药典6 日 版，专着1477），基于比色或沉淀试验。另外，本申请人提出了用于测定 单宁酸 中 的饲料添加剂 的国际公认的FAO JECFA专着用于食品添加剂，其中：（ⅰ） 识别 是基于薄层色谱（TLC），用保留因子（R ˚F的）样品和参考标准必须相同；（ii） 定量 基于重量法。
即使没有提供的性能特性，该EURL建议官方控制欧洲药典方法（欧洲药典6 日 版，专着1477） 和 粮农组织JECFA专着用于测定 单宁酸 中的 饲料添加剂。
为了鉴定调味剂混合物中的 鞣酸 （作为没食子酸） ，申请人提出了一种基于反相高效液相色谱（RP-HPLC）的定性方法，该方法结合了一个在270 nm处测量的UV检测器。为了证明所提出的分析方法的可转移性，在验证研究的框架内，使用四个商业预混料在第二个独立实验室中成功测试了定性方法。
基于提供的令人满意的实验证据，EURL建议申请人进行基于反相高效液相色谱（RP-HPLC）的方法提交的官方控制，以鉴定以下混合物中的 鞣酸 （作为没食子酸） 调味料。
申请人并没有提供用于鉴定的任何实验方法或数据 鞣酸 在 饲料 和 水。因此，EURL不能评价也不推荐用于官方控制以标识任何方法 鞣酸 在 饲料 或 水中。
不需要通过第10条（委员会法规（EC）378/2005号）指定的国家参考实验室联合会对方法进行进一步测试或验证。
20 完整报告可在EURL网站上找到：https：//ec.europa.eu/jrc/sites/default/files/FinRep-FAD-2010-0123.pdf
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