摘要
将120只120日龄肉鸡(Cobb 500)随机分配到4个治疗组，研究单宁酸补充剂(TA)对肉鸡在慢性热暴露条件下的胸肌脂肪酸组成的影响。每组6只雏鸡被分配到以下4个日粮处理中的5个重复组：i) 25°C下不含TA的基础日粮(CL)；ii) 35°C下不含TA的基础日粮(CH)；iii) 25°C下补充1%的TA的基础日粮(TL)；以及iv) 35°C下补充1%的TA的基础日粮(TH)。在5周实验结束时，采集乳腺肌肉样本，检查脂肪酸成分。结果显示，温度、TA及其相互作用效应显著降低了日粮增重和采食量。此外，高温下饲料转化率(FCR)显著增加，高温下添加TA并没有改善FCR。温度、TA及其相互作用对饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸的影响均不显著（P<0.05）。但在日粮中加入TA后，单不饱和脂肪酸明显减少。总的来说，与没有接受TA的热应激鸡相比，TA改善了热应激鸡胸肌的脂肪酸谱。由此看来，日粮中补充TA似乎可以作为热应激条件下家禽营养的生物抗氧化剂来应用。
关键词：热应激；单宁酸；性能；肉鸡 热应激、饲料级单宁酸、性能、脂肪酸谱、肉鸡肉鸡
介绍
热应激被认为是家禽业的一个重要问题，可能是刺激活性氧物种（ROS）的产生（Freeman和Crapo，1982年；Laudicina和Marnett，1990年）。饲料效率、生长速度、死亡率和其他影响家禽生产力的重要性状都受到严重热应激的不利影响。有报道称，暴露在32℃下的肉鸡到6周龄时，FI下降24%（Geraert等人，1996）。脂肪是动物体内主要的能量储存来源（Gunstone等人，1994；Rustan和Drevon，2005）。长期以来，热暴露对脂肪沉积的影响一直以来都有相当大的争议，但大多数研究者提出在热应激条件下脂肪含量会增加（Swain和Farrell，1975；Howlider和Rose，1987；Geraert等，1996）。Shim等(2006)表明，长期的热暴露明显改变了肝脏脂肪酸谱。他们研究了肉鸡在慢性热应激状态下的脂质代谢和过氧化性，报告称热应激增加了过氧化性指数和总饱和脂肪酸(SSFA)，而热应激显著降低了单不饱和脂肪酸(MUFA)和总不饱和脂肪酸(SUFA)。
单宁存在于许多家禽饲料中，例如高粱，小米，大麦和蚕豆。已经证明，包含单宁的饲料成分会导致不良的生理和生化作用（Armstrong 等，1974； Smulikowska 等，2001），包括生长抑制，负氮平衡，肠道糖和氨基酸的吸收减少，降低了免疫反应，增加了蛋白质的分解代谢（Santidrian，1981年； Santidrian和Marzo，1989年； Marzo 等人，2002年））。然而，通过更好地了解单宁的化学组成和生物活性（Mueller-Harvey，2006），现在已知单宁起着有益的抗氧化作用，防止脂质过氧化（Laughton 等，1991； Morel 等，1993）。 ; Caraceni 等，1997 ; Lopes 等，1999 ; Rajalakshmi 等，2001 ; Glahn 等，2002）报告说，栗单宁含量为0.5％时，对家兔的cas体特性，肉质，脂质氧化和脂肪酸组成具有积极影响。
尚未报道过TA对长期暴露于慢性热应激的肉鸡生长和脂肪酸分布的影响。因此，本研究的目的是研究TA预防热应激对肉鸡胸肌性能和脂肪酸分布的不利影响的潜力。
材料和方法
实验设计，鸟类和饮食
根据马来西亚布特拉大学动物护理和使用委员会的动物护理和使用协议对动物进行护理。从马来西亚一家商业孵化场购买的120日龄雄性雏鸡（Cobb 500）称重，并以相同数量（每笼6只）分配给敞开式禽舍中的20个电池笼。将小鸡按24小时连续光照计划饲养，并允许他们随意进食以玉米-大豆为基础的日粮[3000 kcal可代谢能量（ME）/ kg和217.0 g粗蛋白（CP）/ kg；表格1]和水两个星期。此后，随机选择一半的鸡（10个笼），并转移到设定为25°C的温度控制室中，其余10个笼子转移到另一个设定为35°C（H）的室中。为每个隔室随机选择的5个笼子中的鸟提供基础生长日粮（3080 kcal ME / kg和198.1 g CP / kg；表1），向其余5个笼子中的鸟提供基础生长日粮，补充1％单宁酸（a商用单宁，Nacalai Tesque，日本京都）。这导致了以下4个治疗组：i）25°C（CL）的基础饮食，ii）35°C（CH）的基础饮食，iii）25°C（TL）的基础饮食补充1％TA iv）在35°C（TH）下补充1％TA的基础饮食。每天检查鸟类，没有死亡。
表1.基础饮食的饲料成分和组成。
生长表现和样品收集
在实验的第一天称重鸡，此后每周称重五周以计算体重增加（BWG）。饲料转化率（FCR）以每个笼子的饲料摄入量（FI）/ BWG计算。在实验结束时（第35天），从每种处理的6只鸡中采集血样（每只鸟2毫升）以测定血液参数。在收集后的1小时内，通过离心（2500× g，持续15分钟）获得血清，以便随后分析胆固醇，高密度脂蛋白胆固醇（HDL），甘油三酸酯（TG）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL）。
饲料近况分析
按照AOAC（2000）的标准方法对饲料进行了近乎化学分析。干物质（DM）是通过在强制空气烘箱中于80°C下烘箱干燥48小时来确定的。凯氏自动分析仪（Foss Tecator AB，Høganäs，Sweden）用于测定氮以计算CP（CP = N x 6. 25），而乙醚萃取物（EE）在石油醚（40-60°C）中测定）使用2025 Soxtec自动分析仪（Foss Tecator AB，瑞典Høganäs）。通过将样品在马弗炉中在550°C下灰化4小时来确定灰分含量。
脂肪酸谱的测定
根据Folch 等人的方法从饲料和肉类样品中提取总脂肪酸。（1957），如Ebrahimi 等人所述。（2012），使用含丁基化羟基甲苯的氯仿/甲醇2：1（v / v）防止样品制备过程中的氧化。将一克实验饮食或胸肉在50毫升带塞毛玻璃杯中的40毫升氯仿/甲醇（2：1 v / v）中匀浆。过滤混合物后，加入10mL生理盐水以促进相分离。使用甲醇中的KOH和14％的三氟化硼甲醇溶液（BF 3）将提取的脂肪酸反甲基化为其脂肪酸甲酯（FAME）），根据AOAC（2000）。使用30 m×0.25 mm内径×0.2 µm膜厚的Supelco SP 2330毛细管柱，通过气相色谱法（Agilent 7890A；安捷伦科技公司，美国加利福尼亚州，加利福尼亚）分离FAME（Supelco，Bellefonte，PA，美国）。通过自动进样器（Agilent Auto Analyzer 7683 B系列，Agilent Technologies）将每份样品1 µL的量注入配备有分流/不分流进样器和火焰离子化检测器的色谱仪中。载气为氮气，流速为1.2 mL / min。注入1 µL FAME后，分流比为1:20。进样器温度设定为250°C，检测器温度为270°C。柱温程序开始在150°C下运行2分钟，以1°C / min的速度升至158°C，保持28分钟，以1°C / min的速度升至220°C，然后保持20分钟以实现令人满意的分离。确定样品的峰，并根据已知标准品（混合C4-C24甲酯； Sigma-Aldrich，Inc.，圣路易斯，美国密苏里州）的保留时间和峰面积计算浓度。脂肪酸浓度表示为每100克在每个样品中测出的已鉴定脂肪酸之和的g数。
统计分析
所有数据均使用SAS（统计分析系统，2008年）程序版本9.2通过方差分析（ANOVA）进行分析，并采用2×2因子处理排列方式，其中每支笔均视为实验单位。利用的模型包括温度和TA的影响以及交互作用。当检测到显着的相互作用时，邓肯检验用于多个比较。如果P <0.05，则认为结果显着。
结果与讨论
表2中示出了实验饮食的脂肪酸组成。实验饮食中的乙醚提取物，计算出的ME和CP含量相似。日粮中总脂肪含量、, SFA 、, MUFA，Ʃn-6和Ʃn-3多不饱和脂肪酸（PUFA）含量之间没有差异。
表2.基础饮食的脂肪酸组成（每100克总鉴定出的脂肪酸）。
成长表现
表3列出了温度和TA的添加对肉鸡生长性能的影响。结果表明，高温显着（P <0.01）降低了BWG和FI。CH组（35°C下无TA 29.5 g的饲料）的饲料摄入量显着低于P组（25°C下3290 g无TA的饲料饲料）（P <0.01）（P <0.01）。同样，补充TA也会减少（P <0.01）BWG和FI，但其作用比热应激更为严重（TL和TH组分别为2458和2357 g）。在相同温度（25°C）下，TA抑制FI的补充量为25.3％（3290 vs2458克）。温度和TA对BWG和FI的相互作用也很显着。在高温下，FCR显着增加，但是，通过添加TA来增加FCR并不显着。在高温下添加TA略微改善了FCR（表3）。
表3。温度和单宁酸添加对肉鸡最终体重，体重增加，采食量和饲料转化率的影响。
在家禽业中，热应激是一个重大问题，因为热应激会对生产率产生不利影响。Geraert 等。（1996年）报道，暴露于32°C的肉鸡与正常温度相比，到6周龄时，采食量减少了24％。Mashaly 等。（2004）报道，热应激不仅不利地影响鸡的生产性能，而且抑制了鸡的免疫功能。这项研究的结果表明，较高的环境温度通过降低FI抑制了生长性能，这与文献一致（Geraert 等，1996 ; Mashaly 等，2004 ; Quinteiro-Filho 等。，2012）。本研究的结果表明，饲养在35°C以下的禽类的FI下降幅度低于饲养在25°C下的禽类的FI下降10.3％。FI降低了10.3％，BWG降低了15.3％。此外，结果表明TA的影响取决于温度条件。在高温条件下，添加TA会导致BWG和FI降低，但在低温条件下添加TA会稍微改善BWG和FI。
单宁通常被认为是抗营养物质，因为它们能够与膳食营养素形成稳定的复合物，从而降低了饲料的消化率（McSweeney 等，2001； Smulikowska 等，2001）。单宁在禽类营养中的生物学作用与其对饲料摄入（Armstrong 等，1974）和养分利用（Smulikowska 等，2001）的不利影响有关。阿姆斯特朗等。（1974年）表明，向非抗性高粱谷物饮食中添加分子量不同的单宁酸会导致鸡肉性能显着下降。另外，Chang and Fuller（1964）提出的证据表明，当向幼雏饲喂单宁含量相对较高的谷物高粱时，其生长速度会受阻，肝脏脂质会略有升高。饲喂1％的日粮单宁酸也获得了相似的结果，这与高单宁谷物高粱中的单宁酸相同。然而，相反，一些研究人员指出，单宁酸可以改善正常条件下的生长性能（Maertens和Struklec，2006年； Kermauner和Lavren i，2008年； Dalle Zotte和Cossu，2010年）。刘等。（2009）显示板栗木材的天然提取物，单宁含量高，对活重，生产性状，hot体重量，敷料百分比，皮肤重量，pH，蒸煮损失，剪切力和颜色没有明显影响。
肉鸡的血胆固醇，HDL，LDL和TG分析结果总结于表4中。结果表明，高温下胆固醇和HDL含量显着降低（P <0.01）（胆固醇从3.05降低至2.82 mg / dL，HDL从2.02降低至1.78 mg / dL）。然而，热应激对血清的LDL和TG含量没有影响。单独或与高温组合添加TA对这四个测量参数没有影响。
表4.温度和单宁酸对血液胆固醇，高低密度脂蛋白和甘油三酸酯（mg / dL）的影响。
关于TA对脂质代谢的影响的报道很少（Yugarani 等，1992； Levrat 等，1993； Osada 等，2006）。Yugarani 等。（1992年，1993年）报道，TA可以显着降低高脂饮食大鼠的血清和肝脂质浓度。但是，他们服用了低剂量的TA（小于100 mg / kg）。此外，Osada 等。，（2006）表明，与单独的高脂饮食相比，饮食中的多酚倾向于减少脂肪酸的合成并促进脂肪酸β-氧化。Levrat 等。（1993年）表明，首选缩合单宁（quebracho）可提高肝脏3-羟基-3-甲基-谷氨酰-CoA还原酶（HMG-CoA还原酶）的活性，这是胆固醇生成的限速酶。在本研究中，热应激条件下鸡的血浆胆固醇（特别是HDL）降低表明内源性胆固醇代谢可能受到干扰。
在测得的脂肪酸及其比例中，高温仅对C16：1，C17：0和Ʃn-6 / n-3的比例有显着影响，而TA对C14：1，C16：1，C17的影响显着：0，C18：0，C18：1n-9，C20：4n-6，C20：5n-3，ƩMUFA，Ʃn-6 PUFA，Ʃn-3 PUFA，ƩPUFA和PUFA / SFA（表5）。高温（P <0.01）显着提高C16：1，但降低C17：0。但是，添加TA显着（P <0.01）增加C17：0，但降低C16：1含量。TA对C14：1，C20：4n-6，C20：5n-3，n-6 PUFA，n-3 PUFA，PUFA和PUFA / SFA比的影响也增加，但对C18：0的影响减小， C18：1n-9和MUFA。温度和TA的相互作用对C14：1，C18：2n-6，C22：6n-3和andn-6 PUFA有显着影响。对于C14：1，温度升高会降低TA的保护作用。在TH组中，鸡胸肌中C18：2n-6和Ʃn-6 PUFA的含量最高（在35℃下包括TA的处理）。对于C22：6n-3，在不使用TA和使用TA（CH和TH）的情况下进行高温处理分别显示出最少和最多的C22：6n-3。
表5.饮食中补充温度和单宁酸对肉鸡胸肌脂肪酸组成（g / 100 g总脂肪酸）的影响。
必需脂肪酸在免疫，炎症和血液凝结中起重要作用。由于必需脂肪酸不是在鸡体内合成的，因此它们在体内的存在取决于饮食中的存在及其在组织中的氧化速率（Fisher，1984）。因此，通过添加TA作为抗氧化剂，可以在高温下保护胸肌必需脂肪酸谱。Trebble 等。（2004年）表明，饮食中添加抗氧化剂可以抑制脂质过氧化作用和自由基的产生，自由基的产生可能是由于胸肌中PUFA的增加所致。在这项研究中，添加TA改善了高温下Ʃn-6 / n-3的比例，Ʃn-6 PUFA，UFA / SFA和PUFA / SFA，这受到肉类健康消费者的青睐。
Omega-3脂肪酸是正常代谢的重要脂肪酸，几乎被掺入家禽，人类和动物的所有生物区室中，但它们对健康的某些潜在好处尚有争议。在本研究中，添加TA导致n-3脂肪酸（如二十碳五烯酸（C20：5n-3））显着增加。在nn-6 PUFA中，亚油酸（C18：2 n-6）是重要的脂肪酸，是花生四烯酸的前体。花生四烯酸有助于类花生酸的产生，类花生酸是一组生物学上重要的脂质，包括前列腺素，血栓烷，脂类毒素和白三烯（Bourre 等，1993）。
根据本研究的结果，TA降低了肉鸡胸肌中MUFA的含量，但增加了n-3，n-6和总PUFA。但是，它对肌肉的SFA含量没有任何影响。这些结果在某种程度上可以与Cherian 等人的报告相媲美。（2002），他们研究了饲喂高丹宁的高粱肉鸡的肌肉脂肪酸组成。但是，他们报告说，实验组之间的总SFA，MUFA以及n-3和n-6 PUFA并无差异。在这项研究中，温度和TA对肉鸡胸肌脂肪酸组成的相互作用影响仅在C14：1，C18：2n-6，C22：6n-3和Ʃn-6 PUFA中才有意义。这些结果与Shim的结果相反等。（2006年），他将肉鸡暴露于慢性热应激下，并补充了牛磺酸作为抗氧化剂。他们报告说，与在热应激条件下喂饲对照饮食的小鸡相比，通过在饮食中添加牛磺酸，SFA的总水平降低了，但MUFA和UFA的水平却增加了。Khokhar和Apenten（2003）报道，单宁酸的抗氧化效率取决于与芳环结合的羟基的相对位置数和结合位点。一些研究人员表明，单宁酸的抗氧化剂/促氧化剂行为是剂量依赖性的，因为单宁酸无毒浓度的增加会导致O 2-的轻微无明显增加。，NO和丙二醛（MDA）。似乎低浓度的单宁酸对细胞有益，作为ROS中间体的清除剂，可防止ROS的形成和脂质过氧化作用的同时增强（Salminen 等，2001； Bertram 等，2003； Perron和Brumaghim，2009）。
结论
总之，尽管在本实验中补充TA并不能减轻慢性热应激对生长性能的不利影响，但可以改善肉鸡的胸肌脂肪酸谱。这些结果对于提高与人类健康相关的肉质至关重要，并且表明TA可以潜在地用作炎热气候条件下家禽营养的生物抗氧化剂。
Effects-of-Tannic-Acid-on-Performance-and-Fatty-Acid-Composition-of-Breast-Muscle-in-Broiler-Chickens-Under-Heat-Stress致谢
这项研究得到了马来西亚教育部提供的LRGS Fasa 1/2012（马来西亚Putra大学）的支持。
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